Cosmo Bio的骨吸收檢測試劑盒是一種多組分試劑盒，可以用于破骨細胞的培養(yǎng)、分化和骨吸收定量評估。該試劑盒采用檢測熒光信號的方法，熒光信號來自于與平板結合的磷酸鈣釋放到培養(yǎng)基中的熒光胺標記的硫酸軟骨素的積累。

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骨吸收檢測試劑盒利用熒光磷酸鈣(CaP)作為骨細胞吸收活性的底物。培養(yǎng)板(包含在試劑盒中，也可以單獨出售)預先包被有合成結晶碳酸磷灰石，該物質(zhì)是一種天然磷灰石的替代品。在使用前，CaP包被的板會結合熒光胺標記的硫酸軟骨素(包含在試劑盒中，也可以單獨出售)。然后破骨細胞吸收會導致標記的硫酸軟骨素從與板上結合的磷酸鈣中釋放出來。釋放的標記硫酸軟骨素通過熒光測定來定量。該試劑盒還允許進行傳統(tǒng)的Pit分析。另外值得注意的是，也有文獻(Heo, S. C. et al. Int J Mol Sci 22, 695 (2021)和Steller, D., Scheibert, A., Sturmheit, T. & Hakim, S. G. Sci Rep-uk 10, 16861 (2020))在細胞共培養(yǎng)實驗設計中使用該試劑盒，CaP預包被板與trans-well小室一起使用。

● 產(chǎn)品優(yōu)勢：

?? 通過檢測培養(yǎng)基樣品的熒光來測定骨吸收過程

?? 獲得全-世界研究人員認可的成熟方法，且不需要拍照

?? 便于使用的CaP預包被板孔

?? 組分都經(jīng)過無菌處理

?? 熒光激發(fā)和發(fā)射波長與FITC相同。請注意:使用不含酚紅的培養(yǎng)基

?? 檢測的同時允許顯微鏡觀察細胞形態(tài)

?? 去除細胞后允許進行Pit面積測定且可以使用圖像分析軟件

?? 適用于評估破骨細胞對雙膦酸鹽等藥物的反應

● 產(chǎn)品使用實例

圖A. RAW264細胞與RANKL (100 ng/mL)在CaP包被的平板上培養(yǎng)6天的相差顯微鏡照片。OC表示觀察到破骨細胞樣細胞的位置。

圖B. 去除細胞后的平板照片。肉眼可觀察到Pits(左圖無RANKL；右圖有RANKL)。

圖C. 在CaP包被的平板上形成的Pits的顯微照片(用RANKL)。

圖D. Pits面積的RANKL依賴性增加結果(mean±S.D，n = 3)。

圖E. 二膦酸鹽帕米膦酸鹽對RANKL (100 ng/mL)誘導的CaP吸收的抑制作用結果。

● 使用該試劑盒的注意事項：

?? 使用不含酚紅的培養(yǎng)基來減少背景熒光。

?? 破骨細胞分化活性隨細胞類型和培養(yǎng)條件而變化。已知含有HEPES的培養(yǎng)基可調(diào)節(jié)分化活性。在使用該試劑盒之前，我們建議您使用常規(guī)組織培養(yǎng)板來確認您的培養(yǎng)基有促進細胞分化的能力。

?? 避免板子受強光照射。

?? 為了有效刺激細胞，我們建議RANKL濃度≥ 100ng/ml。

?? 因為RANKL刺激會影響細胞附著，所以在更換培養(yǎng)基時要小心。

?? 由于熒光強度隨pH值而變化，并且在酸性條件下較低，我們建議在測量熒光強度時使用“骨吸收測定緩沖液"(貨號CSR-BRA-B1)。

?? 熒光胺標記的硫酸軟骨素降低了破骨細胞的分化。然而，這種減少不足以影響一組雙膦酸鹽藥物的評估。但由于還是對骨吸收測量存在潛在影響，請您在評估已知與硫酸軟骨素相互作用的藥物時謹慎選擇該試劑盒。

?? 某些高濃度的雙膦酸鹽(≥ 100μM)會導致熒光胺標記的硫酸軟骨素（FACS）從CaP包被的板子上釋放。

● 訂購詳情：

??骨吸收檢測試劑盒（Plate+FACS+Buffer）

??骨吸收檢測板子

??FACS和buffer

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