在使用安捷倫鏈霉親和素產(chǎn)品的時(shí)候，可能很多客戶對(duì)有些部分不知道怎么使用，或者對(duì)產(chǎn)品有一些問(wèn)題疑惑。那通過(guò)本文講解鏈霉親和素使用竅門與技巧，就能幫助大家解決這些問(wèn)題了。當(dāng)然，更多關(guān)于鏈霉親和素使用的問(wèn)題，如本文沒提及到，可以聯(lián)系我們欣博盛生物。

1.我可以用水溶解凍干鏈霉親和素嗎？還是必須用 PBS？

鏈霉親和素易溶于水或含鹽緩沖液，濃度高達(dá) 50 mg/mL 以上。在中性或酸性 pH 條件下，凍干鏈霉親和素在重新溶解于水或其他低離子強(qiáng)度緩沖液時(shí)，可能會(huì)發(fā)生聚集。安捷倫鏈霉親和素已在弱堿性 pH 下從稀氯化鈉溶液中凍干，從而盡可能減少聚集體的形成。在極少數(shù)情況下，鏈霉親和素在溶于去離子水或低離子強(qiáng)度緩沖液時(shí)可能含有少量的不溶物質(zhì)，無(wú)論是在最初溶解時(shí)還是在凍融循環(huán)后。在含鹽緩沖液（例如 PBS）存在的情況下，通常觀察不到這種效果。如果觀察到未溶解物質(zhì)，可以通過(guò)離心將其去除，它們不會(huì)構(gòu)成總蛋白質(zhì)的重要部分。

2.如何復(fù)溶鏈霉親和素以避免形成聚集體？

對(duì)于 1 g 或 100 mg 溶液瓶，我們的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是加入足量的緩沖液，使其溶解至 20–50 mg/mL，然后立即開始旋轉(zhuǎn)溶液瓶。例如，您可以將溶液瓶放在工作臺(tái)上，并以緊密的圓周運(yùn)動(dòng)方式將其迅速移動(dòng)。繼續(xù)旋轉(zhuǎn)直到蛋白質(zhì)溶解，這可能需要幾分鐘，從而盡可能減少聚集體的形成。如果之后有一點(diǎn)混濁，請(qǐng)先通過(guò)離心將其去除再使用該材料。當(dāng)以這種方式溶解時(shí)，離心后的回收率應(yīng)與溶液瓶上顯示的 A280 測(cè)量結(jié)果一致。

在溶于水或低離子強(qiáng)度緩沖液時(shí)，避免聚集體形成是最重要的一點(diǎn)（如 SA10 技術(shù)數(shù)據(jù)表中所述）。在 PBS 和更高離子強(qiáng)度緩沖液中復(fù)溶鏈霉親和素似乎對(duì)持續(xù)攪動(dòng)不太敏感。然而，即使在使用 PBS 時(shí)也不要只是添加緩沖液，讓溶液瓶保持不動(dòng)，然后等待鏈霉親和素溶解。對(duì)于分配到微量離心管中的 10 mg 樣品和其他樣品，添加足量的緩沖液使其溶解至 5–50 mg/mL。然后通過(guò)上下移液進(jìn)行混合，直到觀察到內(nèi)容物已經(jīng)溶解。對(duì)于這樣的少量樣品，復(fù)溶非常迅速。

3.產(chǎn)品中是否含有鹽等添加劑？

安捷倫鏈霉親和素以凍干形式提供，每毫克凍干產(chǎn)品含有約0.9 mg 蛋白質(zhì)；其余為氯化鈉。因此，每毫克凍干產(chǎn)品含有0.1 mg 氯化鈉 (10%)。但我們按蛋白質(zhì)含量進(jìn)行分配，如果您購(gòu)買一克鏈霉親和素，您將收到一克鏈霉親和素和額外的鹽，而不是總共一克凍干產(chǎn)品。我們提供 NaCl 的含量信息，為稱量產(chǎn)品的客戶提供參考。

4.在SDS-PAGE 凝膠上觀察到的 SA10 鏈霉親和素分子量應(yīng)該為多少？ 

（分析證書指出該產(chǎn)品應(yīng)主要作為 SDS-PAGE 的單一條帶運(yùn)行。）

鏈霉親和素是分子量約為 52 kDa 的同源四聚體。隨著SDS-PAGE 樣品緩沖液中的熱變性，鏈霉親和素四聚體

分解為單體，在 SDS-PAGE 凝膠上以約 13 kDa 運(yùn)行。在SDS-PAGE 處理之前，必須將鏈霉親和素加熱至沸騰（例如，在含有 0.2% SDS 的上樣緩沖液中于 100 °C 下加熱 20 分鐘），使蛋白質(zhì)*變性。否則，四聚體可能無(wú)法*分解為單體，SDS-PAGE 上可能出現(xiàn)四聚體形式。鏈霉親和素中沒有半胱氨酸殘基（因此沒有二硫鍵），因此樣品緩沖液中是否存在還原劑（如 DTT 或 β-巰基乙醇）不會(huì)有什么不同。

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